Comixsil和Comixshell系列色譜柱使用說明書
菲羅門公司的Comixsil和Comixshell為創(chuàng)新的混合作用（Mixed-mode）液相色譜柱，通過在碳鏈上嵌入離子基團(tuán)，可以實現(xiàn) 在不同的流動相條件下提供離子交換/排阻、Hilic和疏水等作用，可以為大極性化合物和成分之間性質(zhì)差異大的樣品的分析提供新的解決方案。
為了延長Comixsil和Comixshell系列色譜柱的使用壽命，請仔細(xì)閱讀以下操作要點：
一、色譜柱操作注意事項
1. 避免在Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX這幾種固定相上使用醇類流動相，因為這可能與固定相發(fā)生酯化反應(yīng)從而帶來重現(xiàn)與保留的變化，即一般情況下流動相中的有機(jī)相只用乙腈，但不限制THF以及其它類溶劑在流動相中的添加使用；
2. 在使用Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX這幾種固定相時，在連接色譜柱前需要先用不含醇的流動相沖洗管路，防止儀器體系中可能殘存的醇類溶劑進(jìn)入色譜柱；
3. 不要超出Comixsil和Comixshell系列色譜柱的pH范圍使用（見要點四），這兩個系列色譜柱需要始終保存在酸性的緩沖鹽或含有酸的體系中；
4. 不能將色譜柱保存在含有TEA或TFA等調(diào)節(jié)劑的流動相中，這可能會造成色譜填料的改性而影響實驗結(jié)果的重現(xiàn)；
5. 為了獲得好的重現(xiàn)性，需要在進(jìn)樣前進(jìn)行充分的柱平衡；
6. 為了獲得好的重現(xiàn)性，強(qiáng)烈推薦使用柱溫箱以維持色譜柱在運(yùn)行過程中溫度的穩(wěn)定，所有Comixsil和Comixshell系列柱的溫度范圍是0~60 ℃；
7. Comixsil系列柱的最高耐受壓力為5000 Psi（3 μm及5 μm產(chǎn)品），Comixshell系列柱的最高耐受壓力為10000 Psi（2.7 μm 產(chǎn)品），任何時候不能超過這個壓力，否則可能會造成填料損壞或漏液；
8. 一般情況下色譜柱必須按照標(biāo)簽的方向指示運(yùn)行。如果有必要對色譜柱進(jìn)行反沖去除篩板和柱頭污染的話，必須將流速降至0.1 ml/min 進(jìn)行清洗（清洗方法見要點三）；
9. 可以使用PEEK或金屬接頭連接色譜柱，為了降低柱外體積建議使用PEEK管路和PEEK手緊接頭以達(dá)到最好的匹配。
二、色譜柱的平衡方法
配置一瓶濃度為100 mM 的甲酸銨溶液（pH 3.2）；
1. 新色譜柱第一次啟用時，請使用乙腈：100 mM 甲酸銨（pH 3.2）= 75：25 沖洗至少20-30 個柱體積，直到基線平穩(wěn)后再用方法中的流動相起始條件平衡后再進(jìn)樣；
2. 當(dāng)使用中的色譜柱在含不同酸的流動相之間切換（如甲酸切換成 TFA）時，請使用乙腈：100 mM 甲酸銨（pH 3.2）= 75：25 過渡10 個柱體積；
3. 當(dāng)使用中的色譜柱在含酸和銨鹽（甲酸銨/乙酸銨）的流動相之間相互切換時，可以直接相互切換，但要注意平衡時間需要適當(dāng)延長；
4. 當(dāng)使用中的色譜柱在含不同的銨鹽的流動相之間切換時，可以直接相互切換，但要注意平衡時間需要適當(dāng)延長；
5. 當(dāng)需要使用含磷酸鹽的流動相時，請先用乙腈/100 mM 甲酸銨（pH 3.2）（比例隨方法中的比例而定）平衡10 個柱體積，需要注意磷酸鹽與乙腈的比例，防止鹽析現(xiàn)象。
三、色譜柱清洗方法
1. 當(dāng)色譜柱在反相混合模式使用時（即方法流動相中有機(jī)相比例較低時），可使用200 mM 甲酸銨 : 乙腈 = 30 : 70 或 700 mL 乙腈+300 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作為流動相沖洗20-30 個柱體積；
2. 當(dāng)色譜柱在HILIC 混合模式使用時（即方法流動相中有機(jī)相比例較高時），可使用100 mM 甲酸銨 : 乙腈 = 70 : 30 或300 mL 乙腈+700 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作為流動相沖洗20-30 個柱體積。 建議在檢測完樣品后，先按照這個方法清洗色譜柱后再按要求保存（見要點四）。
四、色譜柱的pH 使用范圍和保存條件
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色譜柱型號 |
pH 范圍/建議操作范圍 |
短期保存 |
長期保存 |
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Comixshell CARP |
1.5-7.5/2.0-6.5 |
20 mM 甲酸銨（pH 3.2）/乙腈=25/75 |
乙腈/水/甲酸=75/25/0.1 |
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Comixsil ACRP |
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Comixsil RP-CX Comixsil RP-100 Comixsil RPAC |
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Comixsil HCS |
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Comixshell AIRP |
1.5-6.0/2.0-5.0 |
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Comixsil RP-AX |
五、色譜柱鍵合的類型、存在的主要作用機(jī)制
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色譜柱型號 |
鍵合類型 |
存在的主要作用機(jī)制 |
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Comixshell CARP |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil ACRP |
弱陰離子+弱陽離子+親水鏈 |
陰/陽離子交換/排阻+HILIC |
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Comixsil RPAC |
弱陰離子+弱陽離子+疏水鏈 |
陰/陽離子交換/排阻+疏水 |
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Comixsil RP-CX |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-100 |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil HCS |
弱陰離子+短疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+HILIC |
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Comixshell AIRP |
弱陽離子+疏水鏈 |
陰離子交換（陽離子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-AX |
弱陽離子+疏水鏈 |
陰離子交換（陽離子排阻）+疏水 |
