LCMS適用的溶劑

通常根據(jù)目標(biāo)化合物的溶解性和與LCMS中使用的各種電離技術(shù)的兼容性選擇溶劑。在ESI和其它常壓電離技術(shù)中，溶劑的揮發(fā)性和給質(zhì)子的能力很重要。使用的主要質(zhì)子溶劑像甲醇和其與水的混合物，比如1:1的甲醇水，或1:1的乙腈水(甲醇水混合物增加的粘度超過了純凈的水或甲醇，因?yàn)榘l(fā)生了放熱反應(yīng))。當(dāng)使用100%的水時(shí)，水相對(duì)低的蒸汽壓可能對(duì)靈敏度不利。通過添加揮發(fā)性有機(jī)溶劑，降低表面張力，能提高靈敏度。表面活性劑，雖然能增加從噴霧液滴中釋放出離子，但因其較高的質(zhì)子親和力，可能降低靈敏度。質(zhì)子惰性的共溶劑，像10%DMSO水溶液和異丙醇，對(duì)一些化合物，能提高溶解度。在確保被測(cè)物比溶劑更偏堿性的前提下，甲酸通常以較低的水平(0.1%)添加，便于電離。一些酸，即使是很少量，像TFA，也可能限制靈敏度，但對(duì)增加一些化合物的溶解度可能是必需的。

在ESI電離模式中，緩沖液和鹽(Na+，k+和磷酸鹽)可降低蒸汽壓，導(dǎo)致信號(hào)減弱。液滴的表面張力增加，揮發(fā)性降低，可用相對(duì)更易揮發(fā)的緩沖液，像醋酸銨，形成弱酸-堿對(duì)，進(jìn)行補(bǔ)救。

選擇溶劑需要考慮的問題
- 對(duì)于比溶劑更偏堿性的分子，氣相中的溶劑將限制ESI電離。光電離除外(不是酸堿電離)，但受溶劑調(diào)節(jié)。
- 從電離區(qū)域去除溶劑和水蒸氣，增加在大氣壓下電離化合物的種類。
- 相對(duì)于樣品或溶解在液體中的目標(biāo)被測(cè)物減少液體體積，將提高ESI的性能(如，使用較低流速)。
- 有用的溶劑
- 可接受的添加物
- 非揮發(fā)性鹽(磷酸鹽，硼酸鹽，檸檬酸鹽等等)
會(huì)在離子源沉積，阻塞毛細(xì)管，因此需要更多的清洗和維護(hù)操作。現(xiàn)代離子源設(shè)計(jì)，相比以往的設(shè)計(jì)，能較好地處理非揮發(fā)性物質(zhì)。
- 表面活性試劑(表面活性劑/去垢劑)抑制電噴霧電離的效率
- 無機(jī)酸具有腐蝕性
- 三氟乙酸(TFA)
超過0.01%的水平時(shí)，會(huì)在一定程度上抑制陽離子電噴霧。大大的抑制了陰離子電噴霧。
- 三乙基胺(TEA)
高 PA(232千卡/摩爾)在m/z102處，產(chǎn)生強(qiáng)[M+H]離子。抑制弱堿性化合物陽離子的電噴霧。
- 四氫呋喃(THF)
100%的THF具有高可燃性，因此APCI和絕大多數(shù)接口技術(shù)使用氮?dú)庾鳛閲婌F氣。(使用空氣可能引起爆炸危險(xiǎn)。)會(huì)與PEEK^®管反應(yīng)。

離子抑制
離子抑制是質(zhì)譜學(xué)家使用ESI作為電離方式時(shí)面對(duì)的比較多的具體問題之一。2001年，美國食品藥品管理局(美國FDA)出版了工業(yè)生物分析有效方法指南(聯(lián)邦注冊(cè)號(hào)，66，100，28526)，表明確保分析質(zhì)量的要求是不能妥協(xié)的。該條款指明了可用于評(píng)估離子抑制是否存在的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)方案。將基質(zhì)提取后加標(biāo)樣品中的被測(cè)物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)響應(yīng)(峰面積或峰高)，與直接溶于純流動(dòng)相的被測(cè)物的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)響應(yīng)進(jìn)行對(duì)比。基質(zhì)中被測(cè)物的信號(hào)比在純?nèi)軇┲械牡兀砻骰|(zhì)中存在干擾物質(zhì)。

C.Mallet等發(fā)表的文章表明，在色譜圖中被測(cè)物(和內(nèi)標(biāo)物)基質(zhì)效應(yīng)的存在。試驗(yàn)人員使用三通裝置，將含有目標(biāo)被測(cè)物及其內(nèi)標(biāo)物的溶液以連續(xù)進(jìn)樣方式引入質(zhì)譜，將空白基質(zhì)樣品抽取物通過LC系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣引入質(zhì)譜后，連續(xù)的基線出現(xiàn)下降，表明連續(xù)進(jìn)樣的被測(cè)物的電離受到抑制，因?yàn)榛|(zhì)中有干擾物質(zhì)存在。柱化學(xué)雜交柱化學(xué)和直徑低于2微米的高選擇性顆粒的使用，是色譜柱技術(shù)的一項(xiàng)革命性進(jìn)步。這種雜交化學(xué)性質(zhì)不依賴于可能引起離子抑制的流動(dòng)相的改性，并且增加了顆粒的選擇性。

超高壓力LC與傳統(tǒng)HPLC

通常稱為UHPLC(超高壓液相色譜)，J．Jorgenson教授(北卡羅來納大學(xué))的工作近來實(shí)現(xiàn)了這項(xiàng)技術(shù)的商業(yè)化，UHPLC為增加常規(guī)LCMS分析的信息量提供了可能。Waters公司對(duì)這項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行了商業(yè)化，稱為UPLC技術(shù)，或超高效液相色譜，與HPLC相比，UPLC的峰容量增加，對(duì)HPLC中形成較寬峰的共流出物，可以在UPLC能夠?qū)崿F(xiàn)分離。將色譜峰形(通常條件下)濃縮成2秒或更短的譜帶，為靈敏度的提高提供了可能，有利于質(zhì)譜響應(yīng)，改善信噪比。UPLC技術(shù)的概念改變了傳統(tǒng)LC分離實(shí)踐中建立起來的一些熟知的參數(shù)，比如流速、顆粒大小，甚至對(duì)范第姆特曲線的理解。其工作壓力從大約2000psi增加到高達(dá)20000psi，固定相顆粒直徑小于2μm，接近1969年John Knox在其"Knox方程式"中理論極限。一些伴隨出現(xiàn)的問題，象增大機(jī)械壓力和過大的熱效應(yīng)等，促進(jìn)了MS性能的提高，也稍微偏離了對(duì)理論結(jié)果的直覺。

圖 20：由范第姆特曲線描述的線速度的變化，導(dǎo)致分離效能變化的趨勢(shì)。由圖可知，1.7μm直徑顆粒色譜柱效能更好，且不隨流速變化而改變。雖然所有色譜柱的證據(jù)表明在極端低線速度下會(huì)降低柱效，但是對(duì)HPLC我們所熟知的一個(gè)事實(shí)是，填料直徑越小分離性能越好，并且隨著線速度的增加，性能較少受到影響。在現(xiàn)在被稱為‘傳統(tǒng)'HPLC分離與UPLC分離的比較中，可以認(rèn)為是一個(gè)關(guān)于技術(shù)怎樣重新定義實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法的事例。不但在原理上重新定義分離技術(shù)(速度快近4倍)，而且增強(qiáng)了選擇性，揭示了一些常規(guī)HPLC無法看清的細(xì)節(jié)，比如在圖中的咪達(dá)唑侖的代謝物。提高的分離度顯示出葡萄糖苷酸的二次級(jí)代謝物，m/z=548.125。

圖 21：技術(shù)的提高通常能揭示更多未知細(xì)節(jié)，比如單一葡萄糖苷酸代謝物的色譜峰。

咪達(dá)唑侖的氧化代謝是由肝臟細(xì)胞色素P450蛋白催化的。在上述藥物結(jié)構(gòu)式中，代謝氧化[羥化]最可能發(fā)生的分子內(nèi)主要位點(diǎn)已使用紅星標(biāo)出。1對(duì)咪達(dá)唑侖在膽汁中的代謝物，使用HPLC/MS和UPLC/MS比較分析，發(fā)現(xiàn)在HPLC上有一名義m/z為548的色譜峰。但在UPLC/MS中，則分離出一對(duì)色譜峰，每個(gè)的準(zhǔn)確質(zhì)量值相同，m/z為548.1248。實(shí)測(cè)裂解確認(rèn)這兩個(gè)代謝物均為葡萄糖苷酸化代謝物。作者給出了完全分離的兩種物質(zhì)準(zhǔn)確質(zhì)量對(duì)應(yīng)的經(jīng)驗(yàn)分子式，表明咪達(dá)唑侖在標(biāo)示的位點(diǎn)發(fā)生雙羥化，然后可能在一個(gè)位點(diǎn)發(fā)生O-甲基化，另一個(gè)與葡萄糖醛酸結(jié)合，反之亦然。