標(biāo)準(zhǔn)曲線在分析檢測中扮演著至關(guān)重要的角色,以下是關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的基礎(chǔ)理論知識(shí):
一、標(biāo)準(zhǔn)曲線的定義 分析檢測中的標(biāo)準(zhǔn)曲線是指一系列已知含量(濃度/量)的物質(zhì)與儀器響應(yīng)/信號(hào)之間的關(guān)系。數(shù)學(xué)上,這種關(guān)系可以通過曲線方程來表示;圖形上,則呈現(xiàn)為標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測物質(zhì)的含量。
二、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作要求 按GB/T 22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》推薦,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),應(yīng)遵循以下要求:
濃度范圍:標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍應(yīng)覆蓋正常操作條件下的被測量范圍。 組分一致性:標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分應(yīng)盡量與被測樣品組分一致,以減少基體干擾。 濃度分布:標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值應(yīng)等距離的分布在被測量范圍內(nèi),以確保曲線的準(zhǔn)確性和可靠性。 標(biāo)準(zhǔn)樣品個(gè)數(shù):標(biāo)準(zhǔn)樣品的個(gè)數(shù)至少應(yīng)有3個(gè)濃度,通常建議更多,以提高擬合的準(zhǔn)確性和可靠性。 重復(fù)性:每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)至少重復(fù)2次,這個(gè)重復(fù)是指從稀釋開始,以確保數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和重復(fù)性。 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的核心問題 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)品:需要找到確切濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)品。 基體匹配:標(biāo)準(zhǔn)系列和待測物質(zhì)一定要有相同和一致的基體,以減少樣品基體對(duì)儀器響應(yīng)的干擾。 四、標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)是實(shí)際操作中的難點(diǎn),主要包括以下方面:
精密度檢驗(yàn):考察試驗(yàn)點(diǎn)在擬合直線方程左右的分布情況,需用F檢驗(yàn),P<0.05作為線性檢驗(yàn)合格的標(biāo)準(zhǔn)。 截距檢驗(yàn)和斜率檢驗(yàn):分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差,而b若與0無差別說明儀器的靈敏度達(dá)不到分析要求。 決定系數(shù):是相關(guān)系數(shù)的平方,提示回歸方程所解釋X對(duì)Y變化占Y變量的比值。 失擬檢驗(yàn):看曲線擬合后剩下殘差與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)本身隨機(jī)誤差(變異)之間的差別,同樣采用F檢驗(yàn),此時(shí)失擬檢驗(yàn)P應(yīng)>0.05。 殘差的正態(tài)性檢驗(yàn):正態(tài)性才符合隨機(jī)誤差的特性。 綜上所述,標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)應(yīng)該是線性檢驗(yàn)結(jié)合失擬檢驗(yàn),以及殘差的正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)合,才是統(tǒng)計(jì)學(xué)上比較完備的。
五、標(biāo)準(zhǔn)曲線使用中的問題 是否需要人為增加(0,0)點(diǎn):通常不能人為增加(0,0)點(diǎn),因?yàn)?管進(jìn)入儀器可能也有響應(yīng)值,這也是考察試劑空白的一個(gè)重要步驟。 是否需要減掉試劑空白:不需要。儀器測出來標(biāo)準(zhǔn)系列的響應(yīng)值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應(yīng)值來做,但在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),已經(jīng)認(rèn)為該響應(yīng)值就是0濃度,即已經(jīng)扣除了空白。 含量計(jì)算方法:在使用標(biāo)準(zhǔn)曲線查含量時(shí),可以先用樣品信號(hào)減空白信號(hào),然后去標(biāo)準(zhǔn)曲線推算含量。這樣出來的含量不確定度要小一些。 總之,標(biāo)準(zhǔn)曲線是分析檢測中的重要工具,其制作、檢驗(yàn)和使用都需要嚴(yán)格遵守相關(guān)要求和規(guī)范,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 |